乳制品和嬰幼兒配方乳粉克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）檢測

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乳制品及嬰幼兒配方乳粉中克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）檢測的重要性

克羅諾桿菌屬（Cronobacter spp.），原名阪崎腸桿菌（Enterobacter sakazakii），是一種革蘭氏陰性條件致病菌，廣泛存在于自然環(huán)境中。該菌對嬰幼兒健康威脅極大，尤其是新生兒、早產(chǎn)兒及免疫力低下嬰兒，可能引發(fā)敗血癥、腦膜炎等嚴(yán)重疾病，致死率高達(dá)40%-80%。嬰幼兒配方乳粉作為其主要感染途徑之一，已成為食品安全監(jiān)管的對象。因此，針對乳制品及嬰幼兒配方乳粉中克羅諾桿菌屬的檢測，是保障食品質(zhì)量安全、預(yù)防食源性疾病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

食品法典委員會（CAC）、世界衛(wèi)生組織（WHO）及各國監(jiān)管機(jī)構(gòu)均制定了嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)。例如，我國《食品安全標(biāo)準(zhǔn) 嬰兒配方食品》（GB 10765-2021）明確規(guī)定，針對0-6月齡嬰兒配方乳粉，需確?？肆_諾桿菌屬不得檢出（取樣量為3個獨立包裝，每份100g）。加強檢測不僅關(guān)乎企業(yè)合規(guī)經(jīng)營，更是保護(hù)嬰幼兒群體健康的必要措施。

檢測項目與目標(biāo)

克羅諾桿菌屬檢測的核心目標(biāo)是定性或定量分析樣品中是否存在目標(biāo)菌，并評估污染水平。具體包括：
1. 初篩檢測：通過選擇性培養(yǎng)基分離疑似菌落
2. 生化鑒定：利用酶活性、碳源利用等特征確認(rèn)菌種
3. 分子生物學(xué)檢測：通過基因特異性片段（如esaA、ompA）實現(xiàn)鑒定
4. 溯源分析：對陽性樣本進(jìn)行脈沖場電泳（PFGE）或全基因組測序（WGS）等分型研究

主要檢測儀器與設(shè)備

檢測過程中需配備儀器：
- 微生物培養(yǎng)箱（25℃±1℃和36℃±1℃雙溫區(qū)）
- 實時熒光PCR儀（如ABI 7500）
- 全自動微生物鑒定系統(tǒng)（VITEK 2 Compact）
- 生物安全柜（二級A2型）
- 高壓滅菌鍋（121℃滅菌條件）
- 恒溫水浴鍋（44℃±0.5℃控溫）
- 菌落計數(shù)儀（自動成像分析）

標(biāo)準(zhǔn)檢測方法與流程

現(xiàn)行主流方法遵循標(biāo)準(zhǔn)ISO/TS 22964與我國GB 4789.40-2020：

傳統(tǒng)培養(yǎng)法（參考GB 4789.40-2020）

1. 前處理：無菌稱取100g樣品+900mL緩沖蛋白胨水，37℃預(yù)增菌18-24h
2. 選擇性增菌：轉(zhuǎn)接1mL至10mL改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯（mLST），44℃±0.5℃培養(yǎng)24h
3. 分離培養(yǎng)：劃線接種克羅諾桿菌顯色培養(yǎng)基，25℃±1℃培養(yǎng)48h
4. 生化鑒定：氧化酶試驗、α-葡萄糖苷酶活性檢測、API 20E生化試劑盒驗證
5. 結(jié)果判定：典型菌落呈藍(lán)綠色（顯色培養(yǎng)基），生化反應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)特征

分子生物學(xué)快速檢測法

1. DNA提取：采用磁珠法或煮沸法快速制備模板
2. 實時熒光PCR：針對dnaG基因設(shè)計引物探針，設(shè)置擴(kuò)增程序：95℃預(yù)變性5min→95℃ 15s/60℃ 30s（40循環(huán)）
3. 熔解曲線分析：驗證擴(kuò)增產(chǎn)物特異性，陽性樣本熔解溫度應(yīng)在82℃±1℃
4. 確證試驗：對PCR陽性樣本仍需進(jìn)行傳統(tǒng)培養(yǎng)法復(fù)核

檢測標(biāo)準(zhǔn)與規(guī)范

與國內(nèi)主要檢測標(biāo)準(zhǔn)包括：
- 中國：GB 4789.40-2020《食品微生物學(xué)檢驗 克羅諾桿菌屬檢驗》
- ：ISO/TS 22964:2006《Milk and milk products-Detection of Enterobacter sakazakii》
- 美國：FDA Bacteriological Analytical Manual Chapter 29
- 歐盟：CRL Guidance Document on Detection of Cronobacter spp.

檢測過程中需嚴(yán)格執(zhí)行質(zhì)量控制：
- 每批次實驗設(shè)置陽性對照（ATCC 29544株）與陰性對照（大腸埃希氏菌ATCC 25922）
- 實驗室環(huán)境需定期進(jìn)行沉降菌檢測，確保潔凈度符合GB 4789.28要求
- 培養(yǎng)基每批次進(jìn)行促生長能力驗證

結(jié)論

針對乳制品及嬰幼兒配方乳粉中克羅諾桿菌屬的檢測，需結(jié)合傳統(tǒng)培養(yǎng)法與分子生物學(xué)技術(shù)，形成多維度檢測體系。企業(yè)應(yīng)建立從原料采購到成品出廠的全鏈條監(jiān)控，嚴(yán)格遵循GB 4789.40操作規(guī)范，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。隨著質(zhì)譜快速鑒定、數(shù)字PCR等新技術(shù)的發(fā)展，未來檢測將趨向更高靈敏度與時效性，為嬰幼兒食品安全提供更堅實的保障。